拉曼光譜在生物學研究中的應用 拉曼光譜是研究生物大分子的有力手段,由于水的拉曼光譜很弱、譜圖又很簡單,直讀光譜儀,故拉曼光譜可以在接近自然狀態、活性狀態下來研究生物大分子的結構及其變化。
生物大分子的拉曼光譜可以同時得到許多寶貴的信息:
(1)蛋白質二級結構:α-螺旋、β-折疊、無規卷曲及β-回轉
(2)蛋白質主鏈構像:酰胺Ⅰ、Ⅲ,C-C、C-N伸縮振動
(3)蛋白質側鏈構像:苯丙氨酸、酪氨酸、色氨酸的側鏈和后二者的構像及存在形式隨其微環境的變化
(4)對構像變化敏感的羧基、巰基、S-S、C-S構像變化
(5)生物膜的脂肪酸碳氫鏈旋轉異構現象。
(6)DNA分子結構以及和DNA與其他分子間的作用。
(7)研究脂類和生物膜的相互作用、結構、組分等。
(8)對生物膜中蛋白質與脂質相互作用提供重要信息。
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一般采用三種方法:用已知標準物對照、標準譜圖查對法和直接譜圖解析法。
1.已知物對照應由標準品和被檢物在完全相同的條件下,分別繪制紅外光譜圖進行對照,譜圖相同則肯定為同一化合物。
2. 標準譜圖查對法是一種直接、可靠的方法。在用未知物譜圖查對標準譜圖時,必須注意:測定所用儀器與繪制標準譜圖的在分辨率和精度上的差別,可能導致某些峰細微結構的差別;未知物與標準譜圖的測定條件必須一致,否則譜圖會出現很大差別;必須注意引入雜質吸收帶的影響。如KBr壓片可能吸水而引入水吸收帶等。
3. 對于未知化合物,熒光光譜儀買賣,可按照如下步驟解析譜圖:先從特征頻率區入手,找出化合物含有的主要官能團;指紋區分析,進一步找出官能團存在的依據;仔細分析指紋區譜帶位置、強度和形狀,確定化合物的可能結構;對照標準譜圖,配合其他鑒定手段,彭水光譜儀,進一步驗證。
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